ИЗУЧЕНИЕ СПЕКТРА И ЧАСТОТЫ ВСТРЕЧАЕМОСТИ МУТАЦИЙ ГЕНА embB МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗНОГОКОМПЛЕКСА, АССОЦИИРУЕМЫХ С УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ЭТАМБУТОЛУ, МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙРЕАКЦИИ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ


https://doi.org/10.21292/2075-1230-2017-95-11-27-35

Полный текст:


Аннотация

На основе технологии аллель-специфичной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени изучен спектр возможных мутаций в кодонах 306 и 406 гена embB Mycobacterium tuberculosis, ассоциированного с устойчивостью к этамбутолу. Выявлено 5 различных мутаций в кодоне 306 и 3 мутации – в кодоне 406 гена embB. Выявленные мутации подтверждены методами секвенирования и масс-спектрометрии. В результате анализа частоты встречаемости выявленных embB мутаций разработан набор реагентов для экспресс-определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза (МБТ) к этамбутолу методом мультиконкурентной аллель-специфичной ПЦР в реальном времени. Из 107 исследованных образцов клинических изолятов в 49 (45,8%) обнаружены мутации гена embB МБТ, в 58 (54,2%) – мутаций не обнаружено. В 39 (36,4%) образцах выявлены мутации в 306-м кодоне гена embB, в 9 (8,4%) – обнаружены мутации в 406-м кодоне, и 1 (0,9%) образец определен с мутациями и в 306-м, и в 406-м кодонах. Высокий уровень совпадения результатов молекулярно-генетического и бактериологического анализа лекарственной чувствительности/устойчивости (84%) показал высокую значимость мутаций в кодонах 306 и 406 гена embB МБТ и необходимость их обязательного определения для выявления этамбутол-устойчивых штаммов МБТ. При использовании молекулярно-генетического анализа установлен уровень чувствительности исследования 75,8% при специфичности относительно стандартных культуральных методов 95,6%.


Об авторах

Ю. С. Аляпкина
ООО «НПФ «Синтол»; НИИ фтизиопульмонологии Первого МГМУ им. И. М. Сеченова
Россия

Аляпкина Юлия Сергеевна – ведущий научный сотрудник. 

127550, Москва, Тимирязевская, д. 42.



Е. Е. Ларионова
ФГБНУ «ЦНИИ туберкулеза»
Россия

Ларионова Елена Евгеньевна –  старший научный сотрудник отдела микробиологии. 

107564, Москва, Яузская аллея, д. 2.



Т. Г. Смирнова
ФГБНУ «ЦНИИ туберкулеза»
Россия

Смирнова Татьяна Геннадьевна – старший научный сотрудник отдела микробиологии. 

107564, Москва, Яузская аллея, д. 2.



Я. И. Алексеев
ООО «НПФ «Синтол»; ФГБНУ «Всероссийский НИИ сельскохозяйственной биотехнологии»
Россия

Алексеев Яков Игоревич – научный директор. 

127550, Москва, Тимирязевская, д. 42.



Л. Н. Черноусова
ФГБНУ «ЦНИИ туберкулеза»
Россия

Черноусова Лариса Николаевна – заведующая отделом микробиологии. 

107564, Москва, Яузская аллея, д. 2.



М. А. Владимирский
НИИ фтизиопульмонологии Первого МГМУ им. И. М. Сеченова
Россия

Владимирский Михаил Александрович – заведующий лабораторией иммунологических исследований и молекулярной диагностики туберкулеза 

127473, Москва, ул. Достоевского, д. 4.



Список литературы

1. Аляпкина Ю. С., Алексеев Я. И., Варламов Д. А., Домотенко Л. В., Шипина Л. К., Владимирский М. А. Разработка технологии ПЦР в реальном времени для экспресс-определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам резервного ряда: фторхинолонам, амикацину, капреомицину // Туб. и болезни легких. ‒ 2014. ‒ № 12. ‒ С. 69-75.

2. Владимирский М. А., Аляпкина Ю. С., Варламов Д. А., Алексеев Я. И. и др. Применение метода ПЦР в реальном времени для определения и контроля за распространением лекарственно-устойчивых штаммов микобактерий туберкулеза // Пробл. туб. ‒ 2008. ‒ № 4. ‒ С. 38-44.

3. Туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью / под ред. И. Бастиана. Изд. «Медицина и жизнь», 2003.

4. Alyapkina Yu. S., Vladimirsky M. A., Varlamov D. A., Alekseev J. I., Shipina L. K. Rapid detection of M. tuberculosis gene mutations associated with drug resistance bymodified allele-specific real-time PCR. Abstracrs 16-th ERS Annual Congress, Septemder 2006 // Eur. Resp. J. ‒ 2006. ‒ Vol. 28, suppl. 50. ‒ P. 3456.

5. Dawei Shi et al. Characteristics of embB mutations in multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates in Henan, China // J. Antimicrob. Chemother. ‒ 2011. ‒ Vol. 66. ‒ P. 2240-2247.

6. .Hassan Safi et al. Allelic exchange and mutant selection demonstrate that common clinical embCAB gene mutations only modestly increase resistance to ethambutol in Mycobacterium tuberculosis // Antimicrob. Agents Chemother. ‒ 2010. ‒ Vol. 54, № 1. ‒ P. 103-108.

7. Plinke C. et al. EmbCAB sequence variation among ethambutol-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates without emb306 mutation // J. Antimicrob. Chemother. ‒ 2010. ‒ Vol. 65. ‒ P. 1359-1367.

8. Sreevatsan S. et al. Ethambutol Resistance in Mycobacterium tuberculosis: Critical role of embB mutations // Antimicrob. Agents Chemother. ‒ 1997. ‒ Vol. 41, № 8. ‒ P. 1677-1681.

9. Starks A. M. et al. Mutations at embB codon 306 are an important molecular indicator of ethambutol resistance in Mycobacterium tuberculosis // Antimicrob. Agents Chemother. ‒ 2009. ‒ Vol. 53, № 3. ‒ P. 1061-1066.

10. Zhang Y., Yew W. W. Механизмы развития лекарственной устойчивости у Mycobacterium tuberculosis // Туберкулез и легочные заболевания. ‒ 2011. ‒ Т. 2, № 1. ‒ С. 7-20.


Дополнительные файлы

Для цитирования: Аляпкина Ю.С., Ларионова Е.Е., Смирнова Т.Г., Алексеев Я.И., Черноусова Л.Н., Владимирский М.А. ИЗУЧЕНИЕ СПЕКТРА И ЧАСТОТЫ ВСТРЕЧАЕМОСТИ МУТАЦИЙ ГЕНА embB МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗНОГОКОМПЛЕКСА, АССОЦИИРУЕМЫХ С УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ЭТАМБУТОЛУ, МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙРЕАКЦИИ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ. Туберкулез и болезни легких. 2017;95(11):27-35. https://doi.org/10.21292/2075-1230-2017-95-11-27-35

For citation: Аlyapkinа Y.S., Lаrionovа E.E., Smirnovа T.G., Аlekseev Y.I., Chernousovа L.N., Vlаdimirskiy M.A. INVESTIGATION OF RANGES AND FREQUENCY OF MUTATIONS IN THE embB GENE IN MYCOBACTERIUMTUBERCULOSIS ASSOCIATED WITH RESISTANCE TO ETHAMBUTOL USING REAL-TIME POLYMERASE CHAINREACTION. Tuberculosis and Lung Diseases. 2017;95(11):27-35. (In Russ.) https://doi.org/10.21292/2075-1230-2017-95-11-27-35

Просмотров: 309

Обратные ссылки

  • Обратные ссылки не определены.


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2075-1230 (Print)
ISSN 2542-1506 (Online)