ИЗУЧЕНИЕ СПЕКТРА И ЧАСТОТЫ ВСТРЕЧАЕМОСТИ МУТАЦИЙ ГЕНА embB МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗНОГОКОМПЛЕКСА, АССОЦИИРУЕМЫХ С УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ЭТАМБУТОЛУ, МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙРЕАКЦИИ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

На основе технологии аллель-специфичной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени изучен спектр возможных мутаций в кодонах 306 и 406 гена embB Mycobacterium tuberculosis, ассоциированного с устойчивостью к этамбутолу. Выявлено 5 различных мутаций в кодоне 306 и 3 мутации – в кодоне 406 гена embB. Выявленные мутации подтверждены методами секвенирования и масс-спектрометрии. В результате анализа частоты встречаемости выявленных embB мутаций разработан набор реагентов для экспресс-определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза (МБТ) к этамбутолу методом мультиконкурентной аллель-специфичной ПЦР в реальном времени. Из 107 исследованных образцов клинических изолятов в 49 (45,8%) обнаружены мутации гена embB МБТ, в 58 (54,2%) – мутаций не обнаружено. В 39 (36,4%) образцах выявлены мутации в 306-м кодоне гена embB, в 9 (8,4%) – обнаружены мутации в 406-м кодоне, и 1 (0,9%) образец определен с мутациями и в 306-м, и в 406-м кодонах. Высокий уровень совпадения результатов молекулярно-генетического и бактериологического анализа лекарственной чувствительности/устойчивости (84%) показал высокую значимость мутаций в кодонах 306 и 406 гена embB МБТ и необходимость их обязательного определения для выявления этамбутол-устойчивых штаммов МБТ. При использовании молекулярно-генетического анализа установлен уровень чувствительности исследования 75,8% при специфичности относительно стандартных культуральных методов 95,6%.

1. Аляпкина Ю. С., Алексеев Я. И., Варламов Д. А., Домотенко Л. В., Шипина Л. К., Владимирский М. А. Разработка технологии ПЦР в реальном времени для экспресс-определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам резервного ряда: фторхинолонам, амикацину, капреомицину // Туб. и болезни легких. ‒ 2014. ‒ № 12. ‒ С. 69-75.

2. Владимирский М. А., Аляпкина Ю. С., Варламов Д. А., Алексеев Я. И. и др. Применение метода ПЦР в реальном времени для определения и контроля за распространением лекарственно-устойчивых штаммов микобактерий туберкулеза // Пробл. туб. ‒ 2008. ‒ № 4. ‒ С. 38-44.

3. Туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью / под ред. И. Бастиана. Изд. «Медицина и жизнь», 2003.

4. Alyapkina Yu. S., Vladimirsky M. A., Varlamov D. A., Alekseev J. I., Shipina L. K. Rapid detection of M. tuberculosis gene mutations associated with drug resistance bymodified allele-specific real-time PCR. Abstracrs 16-th ERS Annual Congress, Septemder 2006 // Eur. Resp. J. ‒ 2006. ‒ Vol. 28, suppl. 50. ‒ P. 3456.

5. Dawei Shi et al. Characteristics of embB mutations in multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates in Henan, China // J. Antimicrob. Chemother. ‒ 2011. ‒ Vol. 66. ‒ P. 2240-2247.

6. .Hassan Safi et al. Allelic exchange and mutant selection demonstrate that common clinical embCAB gene mutations only modestly increase resistance to ethambutol in Mycobacterium tuberculosis // Antimicrob. Agents Chemother. ‒ 2010. ‒ Vol. 54, № 1. ‒ P. 103-108.

7. Plinke C. et al. EmbCAB sequence variation among ethambutol-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates without emb306 mutation // J. Antimicrob. Chemother. ‒ 2010. ‒ Vol. 65. ‒ P. 1359-1367.

8. Sreevatsan S. et al. Ethambutol Resistance in Mycobacterium tuberculosis: Critical role of embB mutations // Antimicrob. Agents Chemother. ‒ 1997. ‒ Vol. 41, № 8. ‒ P. 1677-1681.

9. Starks A. M. et al. Mutations at embB codon 306 are an important molecular indicator of ethambutol resistance in Mycobacterium tuberculosis // Antimicrob. Agents Chemother. ‒ 2009. ‒ Vol. 53, № 3. ‒ P. 1061-1066.

10. Zhang Y., Yew W. W. Механизмы развития лекарственной устойчивости у Mycobacterium tuberculosis // Туберкулез и легочные заболевания. ‒ 2011. ‒ Т. 2, № 1. ‒ С. 7-20.